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液相气相色谱之色谱柱的保养

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编辑时间 : 2021-03-30

液相气相色谱之色谱柱的保养


  色谱柱是化合物分离的关键。保养良好的色谱柱具有很高的塔板数,且仪器基线平稳。


  1.避免压力和温度的急剧变化以及任何机械振动。温度的突然变化或色谱柱从高处坠落会影响柱内的填充条件;塔压的突然升高或降低也会对塔内的填料产生冲击,因此应缓慢调节流速,在阀门注入过程中,阀门的旋转不应太慢(如上所述)。


  2.溶剂的组成应该逐渐改变,尤其是反相色谱,不应该直接从有机溶剂变成全水,反之亦然。


  3.色谱柱的反冲洗。用于小分子分离的纳米分析的ChromCore系列和EcoPak系列色谱柱可反冲;用于纳米分析的手性柱UniChiral系列柱可以反洗,留在柱头上的杂质可以通过反洗去除。但是,用于纳米分析的生物大分子液相色谱柱的BioCore系列柱不应进行反冲洗,否则反冲洗会迅速降低柱效。


液相气相色谱之色谱柱的保养


液相气相色谱


  4.选择合适的流动相(尤其是pH值),避免破坏固定相。有时,预柱可以连接在注射器的前面。当分析柱为键合硅胶时,预柱为硅胶,可以使流动相在进入分析柱前被硅胶“饱和”,从而避免硅胶基质在分析柱中的溶解。


  5.避免将基质复杂的样品,特别是生物样品直接注入色谱柱,需要对样品进行预处理或在进样器和色谱柱之间连接保护柱。保护柱一般是填充有相似固定相的短柱。保护柱可以也应该经常更换。


  6.经常用强溶剂清洗色谱柱,以除去残留在色谱柱中的杂质。清洗时,流动通道系统中流动相的更换应逐渐过渡到可混溶的溶剂,每个流动相的体积应为柱体积的20倍左右,即常规分析需要50~75ml。


  以下是一些清洗溶剂和色谱柱顺序供参考:


  硅胶柱依次用正己烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇洗涤,然后以相反的顺序洗涤。所有溶剂必须严格脱水。甲醇可以洗掉残留的强极性杂质,己烷可以使硅胶表面重新活化。反相柱依次用水、甲醇、乙腈和氯甲烷(或氯仿)洗涤,然后以相反的顺序洗涤。


  如果下一次分析中使用的流动相不含缓冲液,可以省略用水洗涤的末尾一步。氯甲烷可以洗掉残留的非极性杂质。用甲醇(乙腈)洗涤时反复注入100~200 l四氢呋喃有助于去除强疏水性杂质。四氢呋喃和乙腈或甲醇的混合溶液可以去除脂质。有时注射几次二甲亚砜。此外,可以通过用乙腈、丙酮和三氟乙酸(0.1%)梯度洗脱来去除蛋白质污染。阳离子交换柱可以用稀酸缓冲液洗涤,阴离子交换柱可以用稀碱缓冲液洗涤除去交换性能强的盐,然后依次用水、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有机物)、甲醇和水洗涤。


  7.保存色谱柱时,色谱柱应填充乙腈或甲醇,并拧紧柱接头,防止溶剂蒸发和干燥。禁止将缓冲溶液留在色谱柱中过夜或更长时间。


  8.如果色谱柱使用过程中压力上升,一种可能是烧结过滤器堵塞,应更换过滤器或取出进行清洗;另一种可能是大分子进入柱内,导致柱头被污染;如果柱效降低或色谱峰变形,柱头可能塌陷,死体积增加。


  当后两种情况发生时,小心地拧松柱接头,用干净的小钢条将柱头填料取出至1~2mm的高度(注意清洗被污染的填料),然后将填料在柱内整平。然后用适当的溶剂(与色谱柱中的溶剂相同)润湿的固定相填充色谱柱,将其展平,然后拧紧色谱柱接头。经过这种处理后,柱的效率有所提高,但很难恢复到新柱的水平。


  列的失效通常在列的末尾。在分析柱前安装一个与分析柱固定相相同的短柱(5~30mm),可以保护和延长柱的使用寿命。使用保护柱来降低一定的柱效是值得的。


  液相气相色谱一般基于硅胶的色谱柱只能在pH2~9范围内使用。色谱柱使用一段时间后,一些吸附性强的物质可能会残留在塔顶,尤其是一些有色物质更容易吸附在塔顶的填料上。新色谱柱使用一段时间后,塔顶的填料可能会塌陷,从而降低柱效。此时,可以添加填料以恢复柱效率。


  每次工作后,用洗脱能力强的洗脱液冲洗。例如,臭氧消耗物质柱应该用甲醇洗涤,直到达到基线平衡。当使用盐缓冲溶液作为流动相时,使用后用无盐流动相洗涤。含有卤素元素(氟、氯、溴)的化合物可能会腐蚀不锈钢管,不应长时间接触。如果安装在高效液相色谱仪上的色谱柱不经常使用,应每4~5天打开一次,清洗15分钟。


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